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本制品是一款是采用TaqMan探针法进行Real-Time PCR的试剂；本制品是将热启动Taq DNA聚合酶、UDG酶、优化的反应Buffer、dNTPs、保护剂及赋形剂等试剂预混制成液体试剂，液体试剂中不含甘油及其他影响冻干的成分，可直接用于冻干样品的制备，以提高样品的稳定性和易用性。进行实验时，加入引物、探针、模板、水即可配制完成PCR反应液。

制剂中引入dUTP/UDG防污染系统，可有效去除体系中存在的污染物，同时当反应体系升温至90～95℃，UDG酶彻底失活，可维持cDNA完整性。本制品可加入多对引物，在单个反应孔中针对多个基因进行多重的荧光定量PCR反应。

本制品采用特殊工艺制备的HotStartTaq DNA聚合酶并结合特别优化的反应及冻干配方制成的可冻干液体试剂，能有效抑制非特异性反应，提高了反应特异性和扩增效率，能够在更广的范围内进行准确定量。并配有不同浓度的ROX Reference Dye，用于不同仪器校正孔间荧光信号误差。

• 该产品可用于制作冻干粉或冻干小球，可添加引物探针进行冻干；
  
• 高特异性：采用特殊工艺制备的HotStart Taq DNA聚合酶，大大提高了PCR扩增的特异性；
  
• 高效：精心配制的Real-Time PCR专用2×SuperMix，具有更高扩增效率和扩增灵敏度；
  
• 快捷：PCR反应所必需试剂集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

• 反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，避免污染。
  
• 引物设计：一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应，扩增目标序列越短越好，一般为200bp以下。

• 使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
  
• qPCR灵敏度高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20～35之间适宜。
  
• 本制品中已含有冻干辅料，若需增加其他冻干辅料，需根据实际检测数据评估后增加。
  
• 复溶后产品使用若有剩余，请将本制品置于-20℃储存，尽量避免反复冻融，影响产品使用。

• 冻干粉样品制备及使用
  
  • 将2×BalbStart Probe qPCR SuperMix(UNG)根据需求进行冻干样品制备；
    
  • 将冻干制备后的样品加入RNase-Free Water进行溶解即可使用；溶解后的剩余试剂置于-20℃保存，尽量避免多次反复冻融。
• 冻干小球体系制备
  
  • 根据以下常用体系进行冻干小球体系配制（20μL）
    

    成分	用量
    2×BalbStart Probe qPCR SuperMix(UNG)	10μL
    上游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
    下游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
    探针（10μM）	0.4μL
    RNase-Free Water	至20μL

  • 将上述液体样品进行冻干；
    
  • 冻干后样品依据下述表格进行复溶：
    

    成分	用量
    冻干小球	1颗
    RNase-Free Water	(20-X)μL

    注：其中X为模板和ROX（需根据机器型号选择）加量
    
  • 确保样品已完全溶解后，加入模板和ROX（需根据机器型号选择）后进行PCR反应。
• 常用PCR循环
  

  反应阶段	循环数	温度	时间
  污染消化	1	50℃	2min
  预变性	1	95℃	5min
  变性	45～50	95℃	10s
  退火/延伸		60℃	40s

• 用ROX I校准的Real Time PCR仪有：
  ABI 5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast；ABI StepOne/StepOnePlus及其他仪器。
  
• 用ROX II校准的Real Time PCR仪有：
  ABI 7500/7500 Fast；ABI ViiA7；ABI Q6；ABI Quant Studio 6/7 Flex；Stratagene MX4000/MX3005P/MX3000P及其他仪器。
  
• 不需要用ROX校准的Real Time PCR仪有：
  Bio-Rad CFX96/CFX 384/iCycler iQ5/iQ/My iQ5/MiniOpticon/Opticon/Opticon 2/Chromo4；Eppendorf Mastercycler ep realplex/realplex 2s；Cepheid SmartCycler；Illumina Eco qPCR；Roche Applied Science LightCycler 480；Thermo Scientific PikoReal Cycler；Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/Rotor-Gene 6000及其他仪器。